Plasmide Double Nickase (m) NCX3: sc-431066-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) NCX3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide NCX3 Double Nickase (m) et le plasmide NCX3 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Slc8a3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) NCX3 | sc-431066-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) NCX3 | sc-431066-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Slc8a3 code l’échangeur Na⁺/Ca²⁺ murin NCX3, un transporteur de la membrane plasmique qui contribue au maintien de l’homéostasie intracellulaire du Ca²⁺ en couplant l’efflux de Ca²⁺ (ou, dans certaines conditions électrochimiques, l’influx) aux gradients de Na⁺. En modulant la dynamique du Ca²⁺ cytosolique, NCX3 influence le couplage excitation–contraction, la transmission synaptique et la gestion du Ca²⁺ mitochondrial, s’intégrant ainsi à des réseaux plus larges de signalisation calcique qui régulent le métabolisme, l’excitabilité membranaire et les réponses au stress. L’activité de NCX3 est particulièrement importante dans les tissus excitables où une clairance rapide du Ca²⁺ est nécessaire, notamment les neurones et le muscle. Une dérégulation de l’échange Na⁺/Ca²⁺ et des voies de surcharge en Ca²⁺ a été associée à des mécanismes de neurodégénérescence, aux réponses aux lésions ischémiques et à des dysfonctionnements cellulaires liés aux myopathies, ce qui fait de Slc8a3 une cible utile pour des études mécanistiques.
NCX3 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Slc8a3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Slc8a3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Slc8a3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Slc8a3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.