NCX2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403352-ACT

SLC8A2 kodiert den menschlichen Na⁺/Ca²⁺-Austauscher NCX2, einen Antiporter der Plasmamembran, der den Na⁺-Gradienten mit der Extrusion von Ca²⁺ koppelt oder unter bestimmten elektrochemischen Bedingungen den Ca²⁺-Einstrom ermöglicht. Durch die Formung der zytosolischen Ca²⁺-Dynamik beeinflusst NCX2 aktivitätsabhängige Signalübertragung, Membranexzitabilität und die Aktivierung Ca²⁺-abhängiger Enzyme und ist damit in Signalwege eingebunden, die synaptische Transmission und neuronale Homöostase regulieren. Ein veränderter Natrium-Calcium-Austausch kann die Ca²⁺-Handhabung und die zelluläre Widerstandsfähigkeit gegenüber ionischem Stress stören, was SLC8A2 zu einem relevanten Ziel für die Untersuchung von Mechanismen im Zusammenhang mit neurologischen Funktionsstörungen und Neurodegeneration macht. Sein neuronangereichertes Expressionsprofil unterstützt zudem Untersuchungen zur regions- und zelltypspezifischen Ca²⁺-Regulation in humanen Modellsystemen.

NCX2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLC8A2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NCX2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLC8A2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLC8A2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NCX2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLC8A2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NCX2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NCX2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLC8A2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.