NCS-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404303

Übersicht

NCS1 kodiert den neuronalen Calcium-Sensor 1 (NCS-1), ein konserviertes, EF-Hand-Ca²⁺-bindendes Protein, das intrazelluläre Calciumtransienten in Signalausgänge an Membranen und Synapsen übersetzt. NCS-1 reguliert Prozesse wie Vesikeltransport und Exozytose, Neuritenauswuchs sowie die Modulation von Rezeptor- und Ionenkanalfunktionen durch Interaktionen mit Zielproteinen wie Phosphatidylinositol-4-Kinasen und Signalkomplexen, die phosphoinositidabhängige Signalwege formen. In menschlichen Zellen trägt NCS-1 zur calciumabhängigen Kontrolle der neuronalen Erregbarkeit und synaptischen Plastizität bei, indem es reizinduzierten Ca²⁺-Einstrom mit nachgeschalteten adaptiven Antworten verknüpft. Veränderungen der NCS-1-Expression oder -Signalgebung wurden im Kontext neuropsychiatrischer und neurodegenerativer Phänotypen untersucht, was seine Relevanz für mechanistische Studien zur Fehlregulation der Calciumsignalübertragung unterstreicht.

Das NCS-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NCS1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NCS1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NCS1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NCS-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NCS1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NCS-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NCS1-Exone abzielen, die für die NCS-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NCS1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NCS-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NCS-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NCS1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NCS-1 HDR-Plasmid (h) und NCS-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NCS1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NCS1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.