Plasmide CRISPR d'Activation (h) NBK: sc-401751-ACT

BIK code NBK, un membre pro‑apoptotique « BH3-only » de la famille BCL‑2, qui favorise la perméabilisation de la membrane externe mitochondriale en antagonisant des protéines anti‑apoptotiques telles que BCL‑2, BCL‑XL et MCL1. NBK intègre la signalisation apoptotique intrinsèque en aval des voies de stress cellulaire et contribue à l’activation des caspases via la régulation de la libération du cytochrome c et l’assemblage de l’apoptosome. Son expression et sa régulation post‑traductionnelle influencent les décisions de destinée cellulaire dans des contextes incluant les réponses aux dommages de l’ADN, le stress du réticulum endoplasmique et la signalisation des cytokines. Une activité dérégulée de BIK/NBK a été associée à une sensibilité altérée à l’apoptose dans de nombreux cancers, ainsi qu’à des processus plus larges pertinents pour la maladie, impliquant l’homéostasie épithéliale et la survie des cellules immunitaires.

NBK Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BIK sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NBK Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BIK dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BIK, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NBK. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BIK natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NBK au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NBK dans les cellules tumorales présentant une expression de BIK silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.