Plasmide CRISPR d'Activation (h) NAT-8L: sc-415533-ACT

Le gène humain **NAT8L** code **NAT-8L**, une N-acétyltransférase qui catalyse la formation de **N-acétylaspartate (NAA)** à partir de l’aspartate et de l’acétyl-CoA, reliant la disponibilité mitochondriale en acétyl-CoA au métabolisme des acides aminés et de l’acétate. Le NAA participe à la gestion du carbone cellulaire et à l’homéostasie des groupements acétyle, avec des conséquences en aval sur la synthèse lipidique et des processus liés à la myéline dans le système nerveux. L’activité de NAT8L est donc pertinente pour le remodelage métabolique et le couplage neurone–glie, et la perturbation des voies associées au NAA a été associée à des phénotypes neurologiques et à des dysfonctionnements neurodéveloppementaux. En tant que nœud métabolique mesurable, NAT8L est fréquemment étudié dans des travaux portant sur la fonction mitochondriale, l’équilibre de l’acétylation et le métabolisme énergétique cérébral.

NAT-8L Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NAT8L sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NAT-8L Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NAT8L dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NAT8L, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NAT-8L. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NAT8L natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NAT-8L au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NAT-8L dans les cellules tumorales présentant une expression de NAT8L silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.