Plásmido CRISPR de Activación (h) NAT-8: sc-411236-ACT

El gen humano NAT8 codifica la NAT-8, una N-acetiltransferasa enriquecida en riñón e hígado, localizada principalmente en las membranas del retículo endoplásmico, que cataliza reacciones de N-acetilación que afectan el manejo de moléculas pequeñas y xenobióticos. La actividad de NAT-8 se vincula con la homeostasis metabólica y los procesos de desintoxicación celular, y se cruza con vías que influyen en las respuestas al estrés oxidativo y en la función del epitelio tubular. La variación genética y la expresión alterada de NAT8 se han asociado con rasgos renales y con la susceptibilidad a lesión renal, lo que lo convierte en un objetivo útil para estudios mecanísticos de nefrotoxicidad y estrés metabólico. En modelos celulares, la expresión de NAT-8 puede modular fenotipos relacionados con el transporte epitelial, la resiliencia celular frente a la exposición química y programas transcripcionales asociados a lesión.

NAT-8 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NAT8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NAT-8 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NAT8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NAT8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NAT-8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NAT8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NAT-8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NAT-8 en células tumorales con expresión de NAT8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.