NAT-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421825

Übersicht

Maus-Nat3 kodiert NAT-3, ein Mitglied der Familie der Arylamin-N-Acetyltransferasen, die Acetyl-CoA-abhängige N‑Acetylierungsreaktionen katalysieren und an der Biotransformation von Xenobiotika beteiligt sind. NAT-3 trägt zur zellulären Entgiftungskapazität bei, indem es die chemische Reaktivität und Elimination aromatischer Amine und verwandter Verbindungen moduliert und dabei in hepatische und extrahepatische Stoffwechselprozesse eingreift. Unterschiede in der Aktivität von NAT-Enzymen sind allgemein relevant für die chemische Anfälligkeit und toxikantgetriebene Gewebereaktionen und unterstützen den Einsatz von Nat3-Modellen in Studien zu stoffwechselassoziiertem Stress und Entzündung. In Mäusen kann ein Nat3-Verlust-der-Funktion dazu beitragen zu klären, wie eine acetylierungsabhängige Metabolisierung unter definierten Expositionsbedingungen die nachgeschaltete zelluläre Homöostase beeinflusst.

Das NAT-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Nat3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Nat3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Nat3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NAT-3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Nat3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NAT-3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Nat3-Exone abzielen, die für die NAT-3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Nat3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NAT-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom NAT-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Nat3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NAT-3 HDR-Plasmid (m) und NAT-3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Nat3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Nat3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.