NAT-10 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-406713-LAC

NAT10 codifica a NAT-10, uma acetiltransferase de RNA mais conhecida por catalisar a deposição de N4-acetilcitidina (ac4C) em diversos substratos de RNA, influenciando a estabilidade do RNA, a eficiência de tradução e a decodificação dependente de códons. Além da modificação de RNA, a NAT-10 tem sido associada a processos nucleolares e ligados à cromatina, incluindo a regulação da biogênese de ribossomos e a coordenação de programas responsivos ao ciclo celular e a danos no DNA. Alterações na atividade de NAT10 têm sido associadas a crescimento desregulado, respostas ao estresse e remodelação do transcriptoma observados em diferentes contextos de doenças proliferativas e do neurodesenvolvimento, o que a torna um nó útil para estudar o controle epitranscriptômico do RNA. Em células humanas, a perturbação de NAT10 pode ajudar a dissecar como o processamento de RNA dependente de ac4C se articula com a proteostase, o estresse replicativo e o estado de diferenciação.

As Partículas de Ativação Lentivirais NAT-10 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de NAT10 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais NAT-10 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição NAT10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de NAT-10. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo NAT10 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.