NAT-10 Plasmide Double Nickase (h): sc-406713-NIC

NAT10 codifica NAT-10, un’N-acetiltransferasi nucleolare/citoplasmatica implicata nell’acetilazione di RNA e proteine, inclusa la regolazione della N4-acetilcitosidina (ac4C) sull’mRNA, che può influenzare la stabilità dei trascritti e l’efficienza di traduzione. NAT-10 partecipa alla biogenesi dei ribosomi, all’omeostasi nucleolare e a processi legati al ciclo cellulare, come le risposte al danno al DNA e la segnalazione dello stress replicativo, integrando un controllo dell’espressione genica dipendente dall’acetilazione con i programmi di crescita cellulare. Un’alterazione dell’attività o dell’espressione di NAT10 è stata associata in letteratura a fenotipi proliferativi, instabilità genomica e deregolazione del metabolismo dell’RNA osservati in molteplici contesti patologici, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico per studiare l’adattamento allo stress e la proteostasi. Di conseguenza, NAT10 è frequentemente studiato in vie che collegano la modificazione dell’RNA, l’organizzazione della cromatina e programmi di tipo senescente nelle cellule umane.

NAT-10 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NAT10 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NAT10. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NAT10. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NAT10 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.