Plásmido Doble Nickase (h) NAT-10: sc-406713-NIC

NAT10 codifica NAT-10, una N-acetiltransferasa nucleolar/citoplasmática implicada en la acetilación de ARN y proteínas, incluida la regulación de la N4-acetilcitidina (ac4C) en el ARNm, lo que puede influir en la estabilidad de los transcritos y en la eficiencia de traducción. NAT-10 participa en la biogénesis de ribosomas, la homeostasis nucleolar y procesos ligados al ciclo celular, como las respuestas al daño en el ADN y la señalización del estrés de replicación, integrando el control de la expresión génica dependiente de la acetilación con los programas de crecimiento celular. En la literatura, la actividad o expresión alterada de NAT10 se ha asociado con fenotipos proliferativos, inestabilidad genómica y un metabolismo del ARN desregulado observado en múltiples contextos de enfermedad, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para estudiar la adaptación al estrés y la proteostasis. Como resultado, NAT10 se investiga con frecuencia en vías que conectan la modificación del ARN, la organización de la cromatina y programas tipo senescencia en células humanas.

NAT-10 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NAT10 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NAT10. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NAT10. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NAT10 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.