NAT-10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406713-ACT

O NAT10 humano codifica a NAT-10, uma acetiltransferase que modifica a citidina no RNA e acetila substratos proteicos, dando suporte à biogênese de ribossomos, ao metabolismo de RNA e à homeostase nucleolar. A atividade da NAT-10 tem sido associada à deposição de N4-acetilcitidina (ac4C) em mRNA e rRNA, influenciando a estabilidade dos transcritos e a eficiência traducional, e também participa de processos ligados à cromatina e à replicação que moldam a progressão do ciclo celular. Por meio dessas funções, a NAT10 se conecta a vias de resposta ao estresse e à regulação de programas de expressão gênica que governam proliferação e diferenciação. Expressão ou atividade desregulada de NAT10 foi relatada em múltiplos contextos de doença, incluindo fenótipos de crescimento associados ao câncer e defeitos celulares relacionados ao neurodesenvolvimento ou ao envelhecimento precoce, tornando-a um alvo relevante para estudos mecanísticos.

NAT-10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NAT10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NAT-10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NAT10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NAT10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NAT-10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NAT10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NAT-10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NAT-10 em células tumorais com expressão de NAT10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.