Na+ CP type Vα CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402162-ACT
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Na+ CP type Vα CRISPR Activation Plasmid (h) ist ein Transkriptionsaktivierungs System (SAM) welches für die gezielte Verstärkung der Genexpression bestimmt ist
- Na+ CP type Vα CRISPR Aktivierungsplasmide (h) bestehen aus 3 Plasmiden im Massenverhältnis 1:1:1: ein Plasmid kodiert für die deaktivierte Cas9 (dCas9) Nuklease (D10A und N863A) fusioniert an die Transaktivierungsdomaine VP64 sowie ein Gen für die Blasticidin Resistenz; ein zweites Plasmid kodierend für das MS2-p65-HSF1 Fusionsprotein sowie ein Gen für die Hygromycin Resistenz; ein drittes Plasmid kodierd für die Ziel-spezifische 20 nt guide RNA fusioniert an zwei MS2 RNA Aptamere sowie ein Gen für die Puromycin Resistenz.
- Der entstehende SAM-Komplex (Mediator-Komplex zur synergistischen Gen-Aktivierung) bindet eine sequenzspezifische Region 200-250 nt upstream (in 5'-Richtung) des Transkriptionsstartsignals und rekrutiert dort ständig Transkriptionsfaktoren für eine verstärkte Gen-Aktivierung und Gen-Expression.
- Die vom Na+ CP type Vα CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) und vom Na+ CP type Vα CRISPR-Aktivierungsplasmid (h2) kodierten gRNAs zielen auf unterschiedliche regulatorische Regionen stromaufwärts der SCN5A-Transkriptionsstartstelle ab. Eines oder beide Designs sind möglicherweise verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Na+ CP type Vα: sc-271255
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Na+ CP type Vα CRISPR Activation Plasmid (h) | sc-402162-ACT | 20 µg | $397.00 |
SCN5A kodiert die porenbildende α‑Untereinheit des spannungsabhängigen Natriumkanals vom Na⁺‑CP‑Typ Vα (NaV1.5), einen entscheidenden Faktor für die schnelle Depolarisation und die Auslösung von Aktionspotenzialen in erregbaren Zellen. Durch die Vermittlung einwärtsgerichteter Na⁺‑Ströme reguliert NaV1.5 die Membran-Erregbarkeit, die Leitungsgeschwindigkeit sowie die Kopplung elektrischer Aktivität an nachgeschaltete Ca²⁺‑Handhabung und Erregungs‑Kontraktions‑Prozesse. Die Funktion von SCN5A ist in Netzwerke der Ionenhomöostase und in Signalwege eingebunden, die das Kanal-Trafficking, eine phosphorylierungsabhängige Gating‑Regulation und stressinduzierte elektrische Remodellierung beeinflussen. Genetische und regulatorische Störungen in SCN5A sind mit einer erhöhten Anfälligkeit für erbliche und erworbene Arrhythmien assoziiert und machen das Gen zu einem zentralen Ziel für mechanistische Studien zur Dynamik des Natriumstroms und zu elektrophysiologisch verknüpften Phänotypen.
Na+ CP type Vα Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SCN5A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.
Na+ CP type Vα Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SCN5A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.
Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SCN5A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Na+ CP type Vα-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SCN5A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Na+ CP type Vα-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Na+ CP type Vα-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SCN5A-Ausdruck.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.