Plasmide CRISPR d'Activation (h) Na⁺ CP type Vα: sc-402162-ACT

SCN5A code la sous-unité α formant le pore du canal sodique voltage‑dépendant de type Na⁺ CP Vα (NaV1.5), un déterminant majeur de la dépolarisation rapide et de l’initiation du potentiel d’action dans les cellules excitables. En médiant des courants entrants de Na⁺, NaV1.5 régule l’excitabilité membranaire, la vitesse de conduction et le couplage de l’activité électrique aux mécanismes en aval de gestion du Ca²⁺ ainsi qu’aux processus d’excitation–contraction. La fonction de SCN5A s’intègre à des réseaux d’homéostasie ionique et à des voies de signalisation qui influencent le trafic du canal, la régulation de l’ouverture/fermeture dépendante de la phosphorylation et le remodelage électrique en réponse au stress. Des perturbations génétiques et régulatrices de SCN5A sont associées à une susceptibilité aux arythmies, héréditaires comme acquises, ce qui en fait une cible centrale pour les études mécanistiques de la dynamique des courants sodiques et des phénotypes liés à l’électrophysiologie.

Na+ CP type Vα Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SCN5A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Na+ CP type Vα Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SCN5A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SCN5A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Na+ CP type Vα. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SCN5A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Na+ CP type Vα au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Na+ CP type Vα dans les cellules tumorales présentant une expression de SCN5A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.