Particules Lentivirales d'Activation (m) Na⁺ CP type IIIα: sc-422820-LAC

Scn3a code, chez la souris, la sous-unité α du canal sodique voltage‑dépendant de type IIIα Na+ CP (Nav1.3), une protéine membranaire formant un pore qui soutient l’initiation et la propagation des potentiels d’action dans les cellules excitables. En médiant un influx rapide et transitoire de Na+, Nav1.3 contribue à la dépolarisation de la membrane neuronale, aux profils de décharge et à l’excitabilité des réseaux, en s’intégrant à l’homéostasie ionique et aux voies de signalisation dépendantes de l’activité. L’expression de Scn3a est régulée de manière dynamique au cours du développement et après une lésion neuronale, et une activité anormale du canal a été associée à des phénotypes d’hyperexcitabilité pertinents pour l’épilepsie, le traitement de la douleur et les troubles neurodéveloppementaux. Ces propriétés font de Scn3a une cible utile pour disséquer la contribution des canaux sodiques à la fonction des circuits et aux mécanismes pathologiques liés à l’excitabilité dans des modèles murins.

Les particules d'activation lentivirales Na+ CP type IIIα (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Scn3a dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Na+ CP type IIIα (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Scn3a, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Na+ CP type IIIα. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Scn3a ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.