Plasmide CRISPR/Cas9 KO Na+ CP type IIIα (m): sc-422820
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Na+ CP type IIIα Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Na+ CP type IIIα, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Na+ CP type IIIα (m) | sc-422820 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Scn3a code, chez la souris, le canal sodique voltage‑dépendant Na+ CP de type IIIα, une sous‑unité α formant le pore qui génère les courants rapides entrants de Na+ à l’origine de l’initiation et de la propagation du potentiel d’action dans les cellules excitables. En modulant le seuil de déclenchement, la fréquence de décharge et la récupération après inactivation, Na+ CP de type IIIα influence l’excitabilité des réseaux neuronaux et des programmes de signalisation dépendants de l’activité liés à la transmission synaptique. L’activité de SCN3A s’inscrit à l’interface de voies d’excitabilité membranaire qui couplent les flux ioniques à la transcription dépendante du calcium, à la conduction axonale et à l’organisation neurodéveloppementale. Des perturbations génétiques et fonctionnelles de SCN3A ont été associées à des phénotypes d’excitabilité altérés et sont étudiées dans le contexte de mécanismes liés à l’épilepsie, de troubles du neurodéveloppement et de dysfonctionnements des circuits.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Na+ CP type IIIα (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Scn3a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Scn3a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Scn3a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Na+ CP type IIIα.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Scn3a pour l'étude de la signalisation de Na+ CP type IIIα, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Scn3a essentiels à la fonction de Na+ CP type IIIα
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Scn3a pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Na+ CP type IIIα plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Na+ CP type IIIα plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Scn3a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Na+ CP type IIIα plasmide HDR (m) et le Na+ CP type IIIα (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Scn3a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Scn3a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.