Plasmide CRISPR/Cas9 KO Na+ CP type Iβ (m): sc-422819
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Na+ CP type Iβ Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Na+ CP type Iβ, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Na+ CP type Iβ (m) | sc-422819 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Scn1b code pour la sous-unité β1 du canal sodique (Na+ CP type Iβ), un composant auxiliaire qui module la cinétique d’ouverture/fermeture des canaux sodiques voltage‑dépendants, leur expression à la surface cellulaire et la stabilité du complexe canal dans les membranes excitables. Au-delà de son rôle dans l’initiation et la propagation des potentiels d’action, SCN1B participe aux interactions neurone–glie et aux processus d’adhésion cellulaire qui influencent l’excitabilité des réseaux et la fonction des axones myélinisés. Chez la souris, l’activité de Scn1b est étroitement liée à des voies contrôlant l’excitabilité membranaire, la transmission synaptique et la susceptibilité aux crises, et des altérations de la fonction β1 ont été associées à l’épilepsie et à des phénotypes neurodéveloppementaux plus larges. Ces propriétés font de Scn1b une cible utile pour disséquer les mécanismes reliant la régulation des canaux ioniques à l’excitabilité des circuits et aux modèles de maladies neurologiques.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Na+ CP type Iβ (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Scn1b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Scn1b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Scn1b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Na+ CP type Iβ.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Scn1b pour l'étude de la signalisation de Na+ CP type Iβ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Scn1b essentiels à la fonction de Na+ CP type Iβ
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Scn1b pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Na+ CP type Iβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Na+ CP type Iβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Scn1b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Na+ CP type Iβ plasmide HDR (m) et le Na+ CP type Iβ (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Scn1b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Scn1b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.