NACA1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-408139-ACT

Humanes NACA kodiert die Alpha‑Untereinheit des naszierenden Polypeptid‑assoziierten Komplexes (NACA1), ein ribosomenassoziiertes Chaperon, das an neu entstehende Polypeptidketten bindet und die ko‑translationale Faltung, Zielsteuerung und Qualitätskontrolle koordiniert. NACA1 wirkt zusammen mit seiner Partner‑Untereinheit, um Interaktionen der naszierenden Kette am ribosomalen Austrittstunnel zu modulieren, und beeinflusst dadurch Proteinbiogenese und Proteostase‑Signalwege, die mit ER‑Targeting und stressadaptiven Antworten verknüpft sind. Indem NACA1 das Gleichgewicht zwischen produktiver Translation und dem Umgang mit fehlgefalteten Proteinen mitbestimmt, ist es relevant für zelluläre Zustände mit veränderter Translationskontrolle, einschließlich proliferativer Programme und Stresssignalgebung. Eine Dysregulation der NACA/NACA1‑Expression wurde in mehreren krankheitsassoziierten Kontexten beschrieben, was mechanistische Studien dazu motiviert, wie ko‑translationale Regulation Zellschicksal und transkriptionelle Netzwerke beeinflusst.

NACA1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NACA-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NACA1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NACA-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NACA-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NACA1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NACA-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NACA1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NACA1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NACA-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.