Plasmide CRISPR d'Activation (h) NaBC1: sc-405950-ACT

BCAS1 (breast carcinoma amplified sequence 1) code pour la protéine humaine NaBC1, un facteur cytoplasmique et associé à la membrane, enrichi dans les cellules gliales myélinisantes et fréquemment utilisé comme marqueur de la dynamique de la lignée oligodendrocytaire. L’expression de BCAS1 est liée à des programmes régissant la différenciation gliale, le remodelage membranaire et l’organisation du cytosquelette, qui soutiennent la formation et le maintien de la myéline dans le système nerveux central. Des niveaux dérégulés de BCAS1 ont été rapportés en oncologie en raison d’amplifications génomiques et d’un contrôle transcriptionnel altéré, ainsi qu’en recherche neurologique où des variations des populations BCAS1-positives reflètent des changements de myélinisation et de l’intégrité de la substance blanche. Ces caractéristiques font de BCAS1 un nœud utile pour étudier la régulation transcriptionnelle de la maturation gliale, les transitions d’état de lignée et le remodelage des cellules myélinisantes associé aux maladies.

NaBC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BCAS1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NaBC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BCAS1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BCAS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NaBC1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BCAS1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NaBC1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NaBC1 dans les cellules tumorales présentant une expression de BCAS1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.