NAB2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402117-ACT

NAB2 (proteína ligante de NGFI-A 2) é um correpressor nuclear de transcrição que modula respostas de genes de ativação imediata ao interagir com fatores de transcrição da família EGR, moldando programas dependentes de estímulo que controlam diferenciação, proliferação e adaptação ao estresse celular. Ao influenciar os resultados transcricionais a jusante da sinalização ligada a MAPK/ERK e de outras vias reguladas por atividade, NAB2 ajuda a ajustar redes gênicas envolvidas no controle do crescimento e na especificação de linhagens celulares. A regulação alterada de NAB2 é relevante para estados transcricionais aberrantes observados na biologia do câncer e em outros distúrbios proliferativos, e fusões gênicas de NAB2 e expressão desregulada têm sido associadas a processos tumorigênicos em contextos específicos. Essas propriedades tornam o NAB2 um alvo útil para dissecar a dinâmica entre fatores de transcrição e correpressores e para mapear circuitos de expressão gênica responsivos a estímulos em células humanas.

NAB2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NAB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NAB2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NAB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NAB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NAB2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NAB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NAB2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NAB2 em células tumorais com expressão de NAB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.