N-type Ca CP α1B Double Nickase Plasmid (h): sc-402397-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das N-type Ca CP α1B Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- N-type Ca CP α1B Double-Nickase-Plasmid (h) und N-type Ca CP α1B Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CACNA1B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
N-type Ca CP α1B Double Nickase Plasmid (h) | sc-402397-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
N-type Ca CP α1B Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402397-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CACNA1B kodiert die porenbildende α1B‑Untereinheit der N‑Typ‑spannungsabhängigen Calciumkanäle (CaV2.2), die in erregbaren Zellen einen durch Depolarisation ausgelösten Ca2+-Einstrom vermitteln. Dieser Kanal koppelt die elektrische Aktivität der Membran an die präsynaptische Vesikelfusion und die Freisetzung von Neurotransmittern und ist in Ca2+-abhängige Signalnetzwerke eingebunden, die synaptische Plastizität, neuronale Erregbarkeit und aktivitätsabhängige Genexpression regulieren. Die Funktion von CACNA1B ist eng mit der Modulation durch G‑Protein‑gekoppelte Rezeptoren und nachgeschaltete Signalwege verknüpft, die die Dynamik der synaptischen Transmission steuern. Genetische Variation oder eine fehlregulierte CaV2.2‑Aktivität wurde mit veränderter nozizeptiver Verarbeitung und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was die Relevanz für mechanistische Studien der Funktion neuronaler Schaltkreise unterstreicht.
N-type Ca CP α1B Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CACNA1B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CACNA1B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CACNA1B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CACNA1B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.