Plasmide CRISPR d'Activation (h) N-Shc: sc-401571-ACT

SHC3 code pour la protéine adaptatrice neuronale N‑Shc, membre de la famille Shc, qui couple les récepteurs à activité tyrosine kinase activés aux cascades de signalisation intracellulaire. N‑Shc participe à la signalisation des neurotrophines et des facteurs de croissance en reliant des récepteurs tels que Trk et l’EGFR aux voies Ras/MAPK et PI3K/AKT en aval, modulant ainsi la différenciation neuronale, la survie et la plasticité synaptique. Grâce à ses domaines PTB et SH2, N‑Shc intègre des interactions dépendantes de la phosphorylation qui influencent la dynamique du cytosquelette et la croissance des neurites. Des altérations de la signalisation SHC3 ont été associées à une dérégulation de programmes de signalisation neuronale étudiés dans des modèles de maladies neurodéveloppementales et neurodégénératives, ainsi qu’à un remaniement de voies oncogéniques dans certains contextes.

N-Shc Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SHC3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

N-Shc Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SHC3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SHC3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de N-Shc. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SHC3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de N-Shc au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie N-Shc dans les cellules tumorales présentant une expression de SHC3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.