Myotilin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406960

Übersicht

MYOT kodiert Myotilin, ein am Z‑Streifen lokalisiertes Zytoskelettprotein, das aktinassoziierte Komponenten bindet und so die Organisation der Sarkomere sowie die mechanische Stabilität in quergestreifter Muskulatur unterstützt. Myotilin ist an der Myofibrillogenese und der Aufrechterhaltung der Z‑Streifen-Architektur beteiligt, unter anderem durch Interaktionen mit Proteinen wie α‑Actinin und Filamin C, und beeinflusst dadurch zytoskelettäre Signalwege und die Mechanotransduktion. Eine Störung der MYOT-Funktion wird mit myofibrillären Myopathien und verwandten Muskelerkrankungen in Verbindung gebracht, die durch Zerfall der Z‑Streifen und Proteinaggregate gekennzeichnet sind, was MYOT für Studien zur Muskelintegrität und zu Stressantworten relevant macht. Als struktureller Knotenpunkt in kontraktilem Gewebe wird Myotilin häufig in Signalwegen untersucht, die die Muskeldifferenzierung, die Proteinhomöostase/Qualitätskontrolle und das zytoskelettäre Remodeling steuern.

Das Myotilin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MYOT-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MYOT-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MYOT nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Myotilin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MYOT-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Myotilin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MYOT-Exone abzielen, die für die Myotilin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MYOT-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Myotilin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Myotilin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MYOT-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Myotilin HDR-Plasmid (h) und Myotilin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MYOT-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MYOT-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.