Myosin XVIIIB CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410206-ACT

Humanes MYO18B kodiert Myosin XVIIIB, ein unkonventionelles, aktinassoziiertes Motorprotein, das an der Organisation der Zytoskelettarchitektur und der Koordination aktinabhängiger Prozesse wie Zelladhäsion, Migration und intrazellulärer Organisation beteiligt ist. Über Interaktionen mit Aktinnetzwerken und Gerüst-/Scaffolding-Komplexen trägt MYO18B zur Mechanotransduktion und zur Aufrechterhaltung der Zellmorphologie bei, indem es die Dynamik des Zytoskeletts mit übergeordneten Signalprogrammen verknüpft, die die Gewebestruktur regulieren. Eine veränderte MYO18B-Expression oder Störungen der zytoskelettalen Regulation wurden in Studien zur Tumorbiologie und zu muskelbezogenen Phänotypen beschrieben, wobei Veränderungen der Aktomyosin-Organisation Invasion, Kontraktilität und Differenzierung beeinflussen können. Daher wird MYO18B häufig in Signalwegen untersucht, die Zellmotilität, zytoskelettales Remodeling und krebsassoziierte Veränderungen des Zellverhaltens steuern.

Myosin XVIIIB Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MYO18B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Myosin XVIIIB Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MYO18B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MYO18B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Myosin XVIIIB-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MYO18B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Myosin XVIIIB-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Myosin XVIIIB-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MYO18B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.