Myosin XVIIIa CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-436163
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Myosin XVIIIa Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Myosin XVIIIa-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Myosin XVIIIa: sc-365328
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Myosin XVIIIa CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-436163 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Myo18a kodiert Myosin XVIIIa, ein unkonventionelles, aktinbasiertes Motor-/Gerüstprotein, das sich in dynamischen Aktinnetzwerken anreichert und zur Organisation des Zytoskeletts, zum Membran-Remodeling und zur Kontrolle der Zellform beiträgt. Myosin XVIIIa wird mit Prozessen wie Zellmigration, Adhäsion und intrazellulärem Transport in Verbindung gebracht, indem es die Assemblierung von Aktinfilamenten und kontraktilen Strukturen koordiniert. In Mausmodellen wird die Funktion von Myo18a häufig im Kontext der Gewebemorphogenese, der Motilität neuronaler und immunologischer Zellen sowie der Regulation von Mechanotransduktions-Signalwegen untersucht. Eine fehlregulierte Aktin-Myosin-Architektur und die damit verbundenen Signalwege können Phänotypen beeinflussen, die für Entwicklungsstörungen und krebsassoziierte Veränderungen der Invasions- und Metastasierungsbiologie relevant sind.
Das Myosin XVIIIa CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Myo18a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Myo18a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Myo18a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Myosin XVIIIa-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Myo18a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Myosin XVIIIa-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Myo18a-Exone abzielen, die für die Myosin XVIIIa-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Myo18a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Myosin XVIIIa CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Myosin XVIIIa CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Myo18a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Myosin XVIIIa HDR-Plasmid (m) und Myosin XVIIIa HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Myo18a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Myo18a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.