Myosin XVIIIA CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403216-ACT

Das humane Gen **MYO18A** kodiert **Myosin XVIIIA**, ein unkonventionelles, aktinassoziiertes Motorprotein, das an der Organisation des kortikalen Zytoskeletts beteiligt ist, die Zellform reguliert und den intrazellulären Transport sowie adhäsionsbezogene Dynamiken koordiniert. Über Interaktionen mit F‑Aktin und Gerüstprotein‑Komplexen trägt MYO18A zu Prozessen wie Vesikeltransport, Golgi‑Organisation und migrationsassoziiertem Remodeling bei, die mit der Rho‑GTPase‑Signalgebung und Mechanotransduktionswegen verknüpft sind. Veränderte MYO18A‑Expression und eine Dysregulation des Zytoskeletts wurden im Kontext invasiven Zellverhaltens und aberranter proliferativer Signalgebung untersucht, was seine Relevanz für krankheitsassoziierte Phänotypen unterstreicht. Diese Eigenschaften machen MYO18A zu einem nützlichen Knotenpunkt, um zu untersuchen, wie aktinbasierte Motoren Membrantransport mit der Architektur des Zytoskeletts in humanen Zellen koppeln.

Myosin XVIIIa Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MYO18A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Myosin XVIIIa Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MYO18A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MYO18A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Myosin XVIIIa-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MYO18A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Myosin XVIIIa-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Myosin XVIIIa-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MYO18A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.