Myosin IIIb CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-414483

Übersicht

MYO3B kodiert Myosin IIIb, ein aktinabhängiges Motorprotein, das die Hydrolyse von ATP mit der Bewegung entlang von F‑Aktin koppelt und am Umbau des Zytoskeletts beteiligt ist. Mitglieder der Myosin‑III‑Familie sind an der Regulation der Dynamik von Membranprotrusionen und der Organisation von Aktinbündeln beteiligt – Prozesse, die für Zellpolarität, Vesikeltransport und signalabhängige Veränderungen der Zellarchitektur zentral sind. Über diese Funktionen unterstützt MYO3B aktingetriebene zelluläre Verhaltensweisen wie Migration und Adhäsion, die mit Signalwegen verknüpft sind, welche die zytoskelettale Spannung und die Mechanotransduktion steuern. Eine Fehlregulation von Aktin‑Myosin‑Netzwerken ist für zahlreiche Erkrankungen relevant, die die Epithelintegrität und die Struktur neurosensorischer Zellen betreffen; daher ist MYO3B ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zur Kontrolle des Zytoskeletts.

Das Myosin IIIb CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MYO3B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MYO3B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MYO3B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Myosin IIIb-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MYO3B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Myosin IIIb-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MYO3B-Exone abzielen, die für die Myosin IIIb-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MYO3B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Myosin IIIb CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Myosin IIIb CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MYO3B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Myosin IIIb HDR-Plasmid (h) und Myosin IIIb HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MYO3B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MYO3B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.