Myosin IIIb Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-414483

Descripción general

MYO3B codifica la miosina IIIb, una proteína motora dependiente de actina que acopla la hidrólisis de ATP al desplazamiento a lo largo de la F‑actina y participa en la remodelación del citoesqueleto. Los miembros de la familia de miosina III están implicados en la regulación de la dinámica de las protrusiones de membrana y en la organización de los haces de actina, procesos esenciales para la polaridad celular, el tráfico vesicular y los cambios dependientes de señales en la arquitectura celular. A través de estas funciones, MYO3B respalda comportamientos celulares impulsados por actina, como la migración y la adhesión, que se integran con vías que controlan la tensión del citoesqueleto y la mecanotransducción. La desregulación de las redes actina–miosina es ampliamente relevante en trastornos que afectan la integridad epitelial y la estructura de células neurosensoriales, lo que convierte a MYO3B en un blanco útil para estudios mecanísticos del control del citoesqueleto.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Myosin IIIb (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MYO3B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MYO3B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MYO3B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Myosin IIIb.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MYO3B para la investigación de la señalización de Myosin IIIb, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MYO3B críticos para la función de Myosin IIIb
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MYO3B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Myosin IIIb CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Myosin IIIb CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MYO3B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Myosin IIIb (h) y el plásmido HDR Myosin IIIb (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MYO3B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MYO3B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.