Myosin Ia CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-436599

Übersicht

Myo1a kodiert Myosin Ia, einen aktinbasierten Motor, der in polarisierten Epithelzellen angereichert ist und dort die Mikrovillus-Struktur sowie die Kopplung zwischen Membran und Zytoskelett an der apikalen Oberfläche unterstützt. Myosin Ia trägt zur Dynamik von Aktinfilamenten, zur Membranspannung und zu Vesikeltransportprozessen bei, die helfen, die Organisation des Bürstensaums und die Funktion der epithelialen Barriere aufrechtzuerhalten. Über Interaktionen mit dem kortikalen Aktinnetzwerk beeinflusst es Signalwege, die Zellpolarität, Absorption und mechanische Antworten im Darmepithel steuern. Eine veränderte Funktion oder Expression von MYO1A wurde mit epithelialer Dysregulation in Verbindung gebracht und in der gastrointestinalen Pathobiologie untersucht, unter anderem im Kontext von Barrierebeeinträchtigung und Tumorentstehung.

Das Myosin Ia CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Myo1a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Myo1a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Myo1a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Myosin Ia-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Myo1a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Myosin Ia-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Myo1a-Exone abzielen, die für die Myosin Ia-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Myo1a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Myosin Ia CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Myosin Ia CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Myo1a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Myosin Ia HDR-Plasmid (m) und Myosin Ia HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Myo1a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Myo1a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.