Myosin Ia Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404995

Visão geral

MYO1A codifica a miosina Ia, uma proteína motora dependente de actina, de cabeça única, que se localiza na membrana apical e contribui para a estrutura das microvilosidades e para a dinâmica de membrana em epitélios polarizados. A miosina Ia acopla interações com filamentos de actina ao tráfego de membranas e à tensão, sustentando processos como o transporte de vesículas, a organização da borda em escova e a manutenção da polaridade celular. Por meio dessas funções de remodelamento do citoesqueleto e da membrana, o MYO1A influencia a integridade da barreira epitelial e programas de diferenciação. Alterações na expressão ou na função de MYO1A têm sido associadas à disfunção epitelial e investigadas no contexto da biologia de doenças gastrointestinais e de doenças derivadas de epitélios.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Myosin Ia (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene MYO1A em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do MYO1A, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do MYO1A na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Myosin Ia.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de MYO1A para a investigação da sinalização de Myosin Ia, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) MYO1A críticos para a função Myosin Ia
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos MYO1A para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Myosin Ia Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Myosin Ia Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus MYO1A. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Myosin Ia Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Myosin Ia (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia MYO1A para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo MYO1A definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.