myoglobin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401370

概要

MBはミオグロビンをコードしており、ミオグロビンはヘムを含む酸素結合タンパク質です。横紋筋において細胞内の酸素貯蔵と拡散を促進し、酸素需要が変動する状況下でも好気性代謝を支えます。酸素の利用可能性を緩衝することで、ミオグロビンはミトコンドリアの酸化的リン酸化、レドックス恒常性、ならびに低酸素や反応性窒素／酸素種に対する応答に影響を及ぼします。MBの発現量や機能の変化は、ミオパチー、虚血に関連する筋障害、さらに筋細胞の広範な代謝適応との関連で検討されてきました。がん研究や心血管生物学の分野では、ミオグロビンに関連する酸素取り扱い機構や酸化ストレス経路が、低酸素条件下における細胞の生存能（フィットネス）を左右する要因としてしばしば解析されています。

myoglobin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMB遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MB内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MBのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、myoglobinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、myoglobinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MB欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• myoglobinの機能に不可欠なMBエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MBゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• myoglobin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびmyoglobin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MB遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  myoglobin HDRプラスミド（h）および myoglobin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMBホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMB標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。