myoglobin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401370

Übersicht

MB kodiert Myoglobin, ein hämhaltiges, sauerstoffbindendes Protein, das die intrazelluläre Sauerstoffspeicherung und -diffusion in quergestreifter Muskulatur erleichtert und so den aeroben Stoffwechsel bei schwankendem Sauerstoffbedarf unterstützt. Durch die Pufferung der Sauerstoffverfügbarkeit beeinflusst Myoglobin die mitochondriale oxidative Phosphorylierung, die Redox-Homöostase sowie Reaktionen auf Hypoxie und reaktive Stickstoff-/Sauerstoffspezies. Veränderte MB-Expression oder -Funktion wurde im Zusammenhang mit Myopathien, ischämiebedingten Muskelschäden und der allgemeineren metabolischen Anpassung von Muskelzellen untersucht. In der Onkologie und der kardiovaskulären Biologie werden myoglobinassoziierte Mechanismen der Sauerstoffhandhabung und oxidativen Stresswege häufig als Determinanten der zellulären Fitness unter Bedingungen begrenzter Sauerstoffverfügbarkeit erforscht.

Das myoglobin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MB-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MB-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MB nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die myoglobin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MB-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der myoglobin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MB-Exone abzielen, die für die myoglobin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MB-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom myoglobin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom myoglobin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MB-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das myoglobin HDR-Plasmid (h) und myoglobin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MB-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MB-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.