MyoD Double Nickase Plasmid (h): sc-400092-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MyoD Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MyoD Double-Nickase-Plasmid (h) und MyoD Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MYOD1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MyoD: sc-377186
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MyoD Double Nickase Plasmid (h) | sc-400092-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MyoD Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400092-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MYOD1 kodiert MyoD, einen basischen Helix-Loop-Helix-Transkriptionsfaktor, der als Masterregulator der Skelettmyogenese wirkt, indem er an E-Box-Motive bindet und das Chromatin-Remodeling mit der linienspezifischen Genexpression koordiniert. MyoD integriert Signale aus Netzwerken myogener Regulationsfaktoren und steht in Wechselwirkung mit Notch-, Wnt/β-Catenin-, TGF-β- und MAPK-Signalwegen, um das Gleichgewicht zwischen Progenitor-Proliferation und Differenzierung zu steuern. Über kooperative und antagonistische Interaktionen mit Faktoren wie MYOG, MEF2 und ID-Proteinen fördert es die Festlegung von Myoblasten, den Austritt aus dem Zellzyklus und Programme für muskelstrukturelle Gene. Eine Fehlregulation der MYOD1-Aktivität ist relevant für beeinträchtigte Muskelregeneration und die Biologie neuromuskulärer Erkrankungen; zudem werden MYOD1-Veränderungen im Kontext myogener Tumoren und von Linienplastizität untersucht.
MyoD Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MYOD1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MYOD1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MYOD1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MYOD1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.