Plasmide CRISPR d'Activation (h) MYL3: sc-403198-ACT

MYL3 code la chaîne légère de la myosine 3, un composant régulateur du complexe moteur myosine II qui module le cycle des ponts actine–myosine et la génération de force contractile dans le muscle strié. En ajustant l’activité ATPasique de la myosine et les interactions entre filaments, MYL3 contribue à l’organisation du sarcomère, à la contractilité sensible au calcium et à la mécanique myofibrillaire. Une expression altérée de MYL3 ou certaines variantes ont été associées à des phénotypes cardiomyopathiques et à une fonction du muscle cardiaque perturbée, ce qui en fait un marqueur utile pour étudier la biologie du sarcomère et la signalisation liée à la contractilité. MYL3 humain est donc pertinent pour explorer le développement musculaire, les réponses au stress mécanique et les voies qui régissent la structure et les performances des cardiomyocytes.

MYL3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYL3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MYL3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYL3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYL3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MYL3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYL3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MYL3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MYL3 dans les cellules tumorales présentant une expression de MYL3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.