MYH9 Lentiviral Activation Particles (m): sc-421784-LAC

Myh9 kodiert das nichtmuskuläre Myosin IIA (MYH9), ein aktinabhängiges Motorprotein, das in Mauszellen kontraktile Kräfte erzeugt und die Organisation des Zytoskeletts unterstützt. MYH9 reguliert Adhäsionsdynamik, Zellpolarität und Migration, indem es das Aktomyosin-Remodeling, die Bildung von Stressfasern und die Mechanotransduktion koordiniert, mit nachgelagerten Effekten auf Prozesse wie die Zytokinese und die Integrität epithelialer Barrieren. Über Interaktionen mit der RhoA/ROCK-Signalkaskade, Komponenten fokaler Adhäsionen und der Membrantransport-Maschinerie trägt MYH9 dazu bei, mechanische Signale mit Veränderungen der Zellform und Genexpressionsprogrammen zu koppeln. Eine veränderte MYH9-Aktivität wurde mit Defekten in der hämatopoetischen und renalen Biologie in Verbindung gebracht und wird breit in Kontexten untersucht, die Thrombozytopenie, glomeruläre Dysfunktion und zytoskelettassoziierte Entwicklungsphänotypen betreffen.

MYH9 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Myh9-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

MYH9 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Myh9-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen MYH9-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Myh9-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.