Plásmido CRISPR de Activación (h) MYH8: sc-400346-ACT

MYH8 codifica la cadena pesada de miosina 8, una proteína motora sarcomérica que impulsa la contractilidad dependiente de actina y contribuye a la formación de filamentos gruesos en el músculo estriado. Como parte del complejo de miosina II, MYH8 favorece la generación de fuerza dependiente de ATP e influye en la organización de las miofibrillas, la maduración de las fibras musculares y la dinámica del citoesqueleto. La expresión de MYH8 está regulada durante el desarrollo y a menudo se encuentra enriquecida en contextos especializados o en desarrollo del músculo esquelético, lo que la hace relevante para estudios de miogénesis y plasticidad muscular. La regulación alterada o variantes que afectan la función motora de la miosina se han asociado con miopatías congénitas y fenotipos relacionados con la artrogriposis distal, lo que vincula a MYH8 con mecanismos de enfermedad neuromuscular.

MYH8 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MYH8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MYH8 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MYH8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MYH8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MYH8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MYH8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MYH8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MYH8 en células tumorales con expresión de MYH8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.