Plásmido CRISPR de Activación (h) MYH10: sc-401835-ACT

MYH10 codifica la miosina IIB no muscular, una proteína motora basada en actina que impulsa la generación de fuerza contráctil y regula la organización del citoesqueleto, la adhesión celular y la migración direccional. A través de su papel en las redes de actomiosina, MYH10 contribuye a la citocinesis, la morfogénesis tisular y la mecanotransducción, y se integra con vías que controlan la señalización de las GTPasas Rho, la dinámica de las adhesiones focales y la tensión cortical. La alteración de la expresión de MYH10 o de la función de la miosina II se ha relacionado con una motilidad celular desregulada y con procesos del desarrollo, lo que la hace relevante para estudios de remodelación epitelial, neurodesarrollo y fenotipos celulares asociados a la fibrosis. Como componente central del citoesqueleto, MYH10 se investiga con frecuencia en modelos que exploran cambios en la forma celular, la función de barrera y la señalización dependiente de fuerzas.

MYH10 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MYH10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MYH10 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MYH10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MYH10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MYH10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MYH10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MYH10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MYH10 en células tumorales con expresión de MYH10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.