Plasmide CRISPR d'Activation (h) MYEOV2: sc-409378-ACT

COPS9 (également connu sous le nom de MYEOV2) code un composant associé au signalosome COP9, un régulateur conservé des ligases ubiquitine cullin‑RING qui ajuste le renouvellement des protéines via la déneddylylation et les voies ubiquitine–protéasome. En contrôlant la dégradation dépendante de l’ubiquitine, les processus liés à COPS9/MYEOV2 influencent la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et des programmes de transduction du signal, notamment les réseaux associés à MAPK et à NF‑κB. Un dérèglement de l’activité du signalosome COP9 a été associé à une protéostasie aberrante et à une reprogrammation transcriptionnelle observées dans de multiples contextes cancéreux, ce qui motive l’étude de COPS9/MYEOV2 dans les phénotypes de prolifération et d’adaptation au stress. Ces fonctions en font une cible pertinente pour des études mécanistiques de la régulation médiée par l’ubiquitine et des interactions entre voies de signalisation dans les cellules humaines.

MYEOV2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de COPS9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MYEOV2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus COPS9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription COPS9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MYEOV2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus COPS9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MYEOV2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MYEOV2 dans les cellules tumorales présentant une expression de COPS9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.