Myc CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400001-ACT

MYC kodiert den Transkriptionsfaktor Myc, einen zentralen Regulator von Zellwachstum, Stoffwechsel und Proliferation, der die von RNA-Polymerase II abhängige Transkription moduliert, indem er an E-Box-Elemente bindet und die Rekrutierung chromatinassoziierter Kofaktoren koordiniert. Myc integriert Signale aus mitogenen Signalwegen wie RTK/RAS/MAPK und PI3K/AKT/mTOR und prägt Programme, die die Ribosomenbiogenese, Nukleotidsynthese, mitochondriale Funktion und den Fortschritt des Zellzyklus steuern. Eine strenge Regulation der MYC-Expression ist für die Aufrechterhaltung von Differenzierung und Gewebehomöostase essenziell, während eine Fehlregulation häufig mit genomischer Instabilität, veränderten Stoffwechselzuständen und onkogener transkriptioneller Reprogrammierung einhergeht. Entsprechend wird MYC aufgrund seiner Rollen in der Tumorbiologie, in Stressantworten und in kontextabhängiger Transkriptionskontrolle umfassend untersucht.

Myc Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MYC-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Myc Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MYC-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MYC-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Myc-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MYC-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Myc-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Myc-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MYC-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.