Plasmide CRISPR/Cas9 KO MYBPHL (h): sc-406488

Présentation

MYBPHL (myosin-binding protein H-like) code une protéine accessoire sarcomérique putative, exprimée principalement dans le muscle strié, où elle serait associée aux filaments épais contenant la myosine et contribuerait à l’organisation des myofibrilles. En influençant l’architecture contractile actomyosine, MYBPHL est impliquée dans des processus tels que l’assemblage du sarcomère, la stabilité du cytosquelette et la signalisation de mécanotransduction dans les cardiomyocytes et les cellules musculaires squelettiques. Des modifications des profils d’expression des membres de la famille des myosin-binding proteins ont été rapportées dans des contextes de remodelage cardiaque, ce qui étaye l’utilisation de MYBPHL comme nœud mécanistique pour étudier les voies contractiles sensibles au stress. L’étude fonctionnelle de MYBPHL peut éclairer la manière dont les protéines associées aux myofibrilles modulent la différenciation des cellules musculaires et les réseaux géniques liés à la contractilité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MYBPHL (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MYBPHL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MYBPHL, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MYBPHL à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MYBPHL.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MYBPHL pour l'étude de la signalisation de MYBPHL, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MYBPHL essentiels à la fonction de MYBPHL
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MYBPHL pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MYBPHL plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MYBPHL plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MYBPHL. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MYBPHL plasmide HDR (h) et le MYBPHL (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MYBPHL pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MYBPHL définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.