Plasmide CRISPR/Cas9 KO Mx1 (h): sc-400977

Présentation

MX1 code la protéine de résistance aux myxovirus 1 (Mx1), une GTPase de type dynamine induite par l’interféron, qui assure une défense antivirale intrinsèque en limitant la réplication de divers virus à ARN. Mx1 est induite en aval des voies de signalisation des interférons de type I et de type III via la voie JAK–STAT, et s’inscrit dans des programmes plus larges d’immunité innée régis par une transcription pilotée par ISGF3. En modulant le trafic des nucléocapsides virales et l’intégrité des complexes de réplication, Mx1 contribue aux réponses de stress cellulaire qui façonnent la production de cytokines et la résistance intrinsèque des cellules immunitaires. Une expression dérégulée de MX1 est largement utilisée comme marqueur moléculaire de l’activation des voies de l’interféron et présente un intérêt pour l’étude de la susceptibilité virale, des états inflammatoires chroniques et des microenvironnements tumoraux caractérisés par des signatures d’interféron élevées.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Mx1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MX1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MX1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MX1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Mx1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MX1 pour l'étude de la signalisation de Mx1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MX1 essentiels à la fonction de Mx1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MX1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Mx1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Mx1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MX1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Mx1 plasmide HDR (h) et le Mx1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MX1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MX1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.