Muskelin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409182

Übersicht

MKLN1 kodiert Muskelin, ein zytosolisches und vesikelassoziiertes Scaffold-Protein, das an intrazellulärem Transport, Zytoskelettorganisation und Proteostase beteiligt ist. Muskelin wirkt an endosomalem Transport und zelladhäsionsbezogenen Prozessen mit und wurde mit der Regulation des Turnovers von Rezeptoren und Ionenkanälen in Verbindung gebracht, indem es die Koordination von Multiproteinkomplexen unterstützt. Durch die Beeinflussung mikrotubuliabhängiger Dynamiken und der subzellulären Lokalisation von Signalkomponenten kann MKLN1 Signalwege modulieren, die Zellmorphologie, Migration und Stressantworten steuern. Eine veränderte MKLN1-/Muskelin-Funktion wurde im Kontext der Neurobiologie sowie krebsassoziierter Phänotypen untersucht, was ihre Relevanz für mechanistische Studien zu transportabhängiger Signalgebung und zellulärer Homöostase unterstreicht.

Das Muskelin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MKLN1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MKLN1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MKLN1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Muskelin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MKLN1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Muskelin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MKLN1-Exone abzielen, die für die Muskelin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MKLN1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Muskelin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Muskelin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MKLN1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Muskelin HDR-Plasmid (h) und Muskelin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MKLN1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MKLN1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.