Plasmide Double Nickase (m) MULK: sc-427577-NIC

Le gène murin **Agk** code **MULK**, une acylglycérol kinase mitochondriale qui phosphoryle le monoacylglycérol et le diacylglycérol pour générer l’acide lysophosphatidique et l’acide phosphatidique, établissant un lien entre le métabolisme des lipides et la biogenèse des membranes. L’activité de MULK soutient l’architecture mitochondriale, le remodelage des phospholipides et l’homéostasie bioénergétique, avec des effets en aval sur la sensibilité à l’apoptose et les réponses cellulaires au stress. La perturbation de la fonction d’AGK/MULK a été associée à une phosphorylation oxydative altérée et à une signalisation lipidique modifiée, ce qui rend cette voie pertinente pour l’étude du dysfonctionnement mitochondrial et des mécanismes des maladies métaboliques. Dans les systèmes murins, **Agk** est également utilisé pour examiner comment les intermédiaires lipidiques mitochondriaux modulent la dynamique des organites et les réseaux de signalisation.

MULK Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Agk dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Agk. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Agk. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Agk.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.