Plasmide CRISPR/Cas9 KO mucolipin 1 (m): sc-430117

Présentation

Mcoln1 code la mucolipine 1 (TRPML1), un canal cationique endolysosomal perméable au Ca2+ qui régule la biogenèse des lysosomes, le trafic membranaire et le flux autophagique. La libération de Ca2+ médiée par TRPML1 favorise la fusion lysosome–autophagosome, le traitement du contenu endocytaire et des voies de signalisation liées à la détection des nutriments et aux réponses cellulaires au stress. La perturbation de la fonction de la mucolipine 1 altère l’homéostasie lysosomale, favorisant l’accumulation de substrats non dégradés et une modification du contrôle qualité mitochondrial. Mcoln1 est donc largement étudié dans des modèles de maladies de surcharge lysosomale et de défauts de la fonction endolysosomale associés à la neurodégénérescence.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO mucolipin 1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Mcoln1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Mcoln1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Mcoln1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine mucolipin 1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Mcoln1 pour l'étude de la signalisation de mucolipin 1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Mcoln1 essentiels à la fonction de mucolipin 1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Mcoln1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le mucolipin 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le mucolipin 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Mcoln1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le mucolipin 1 plasmide HDR (m) et le mucolipin 1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Mcoln1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Mcoln1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.