Mucin 6/MUC6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402946
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Mucin 6/MUC6 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Mucin 6/MUC6-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Mucin 6/MUC6: sc-33668
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Mucin 6/MUC6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-402946 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
MUC6 kodiert Mucin 6, ein sezerniertes, stark O-glykosyliertes, gelbildendes Mucin, das zur schützenden Schleimbarriere auf epithelialen Oberflächen beiträgt. Über seine ausgeprägten Glykanstrukturen und die Bildung einer polymeren Matrix hilft MUC6, Hydratation und Viskosität sowie Interaktionen mit Mikroben und luminalen Faktoren zu regulieren und so die mukosale Homöostase und die angeborene Abwehr zu prägen. Seine Expression ist mit epithelialer Differenzierung und Programmen der Mucinbiosynthese verknüpft, die mit ER-/Golgi-vermittelten Glykosylierungswegen und Prozessen der Barriereerhaltung zusammenwirken. Eine dysregulierte MUC6-Expression und veränderte Muster der Mucinglykosylierung stehen in Zusammenhang mit entzündlicher Schädigung und epithelialem Umbau bei gastrointestinalen und anderen mukosaassoziierten Erkrankungen und werden in der Krebsbiologie häufig als Biomarker für Linienzugehörigkeit sowie für Zustände schleimbildender Zellen bewertet.
Das Mucin 6/MUC6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MUC6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MUC6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MUC6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Mucin 6/MUC6-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MUC6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Mucin 6/MUC6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf MUC6-Exone abzielen, die für die Mucin 6/MUC6-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere MUC6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Mucin 6/MUC6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Mucin 6/MUC6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MUC6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Mucin 6/MUC6 HDR-Plasmid (h) und Mucin 6/MUC6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MUC6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MUC6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.