Mucin 6/MUC6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402946

Panoramica

MUC6 codifica la mucina 6, una mucina secretoria, fortemente O-glicosilata e capace di formare gel, che contribuisce alla barriera protettiva di muco sulle superfici epiteliali. Grazie alle sue estese strutture glicidiche e alla formazione di una matrice polimerica, MUC6 aiuta a regolare idratazione, viscosità e le interazioni con i microbi e con i fattori presenti nel lume, contribuendo all’omeostasi mucosale e alla difesa innata. La sua espressione è collegata alla differenziazione epiteliale e ai programmi di biosintesi delle mucine, che si interfaccia con le vie di glicosilazione nel RE/Golgi e con i processi di mantenimento della barriera. Un’espressione deregolata di MUC6 e pattern alterati di glicosilazione delle mucine sono associati a danno infiammatorio e rimodellamento epiteliale in patologie gastrointestinali e in altre malattie delle mucose; inoltre, MUC6 viene spesso valutata come biomarcatore di linea cellulare e dello stato delle cellule mucipare in oncologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Mucin 6/MUC6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MUC6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MUC6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MUC6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Mucin 6/MUC6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MUC6 per lo studio della segnalazione di Mucin 6/MUC6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MUC6 critici per la funzione di Mucin 6/MUC6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MUC6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Mucin 6/MUC6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Mucin 6/MUC6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MUC6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Mucin 6/MUC6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Mucin 6/MUC6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MUC6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MUC6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.