Mucin 5B/MUC5B Double Nickase Plasmid (h): sc-401077-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Mucin 5B/MUC5B Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Mucin 5B/MUC5B Double-Nickase-Plasmid (h) und Mucin 5B/MUC5B Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MUC5B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Mucin 5B/MUC5B: sc-21768
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Mucin 5B/MUC5B Double Nickase Plasmid (h) | sc-401077-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Mucin 5B/MUC5B Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401077-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MUC5B kodiert für Mucin 5B, ein hochmolekulares, gelbildendes, sezerniertes Mucin, das stark O-glykosyliert ist und durch Disulfidbrücken polymerisiert, um die Schleimbarriere auf dem Atemwegsepithel und anderen mukosalen Epithelien zu bilden. Diese Barriere reguliert die mukoziliäre Clearance, die Hydratation und die angeborene Abwehr, indem sie die viskoelastischen Eigenschaften des Schleims prägt und Interaktionen mit Mikroben und Partikeln beeinflusst. Die Expression von MUC5B wird durch Programme der epithelialen Differenzierung sowie durch entzündliche Signalwege gesteuert, darunter zytokinvermittelte transkriptionelle Antworten und die ER–Golgi-Sekretionsprozessierung, die die Mucin-Biosynthese unterstützt. Dysregulierte MUC5B-Spiegel oder veränderte Schleimeigenschaften wurden mit chronischen Atemwegserkrankungen und fibrotischer Lungenpathologie in Verbindung gebracht, was MUC5B zu einem zentralen Ziel für die Untersuchung der epithelialen Homöostase und mukosalen Abwehrmechanismen macht.
Mucin 5B/MUC5B Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MUC5B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MUC5B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MUC5B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MUC5B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.