Mucin 5B/MUC5B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401077
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Mucin 5B/MUC5B Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Mucin 5B/MUC5B-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Mucin 5B/MUC5B: sc-21768
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Mucin 5B/MUC5B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-401077 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
MUC5B kodiert Mucin 5B, ein hochmolekulares, gelbildendes, sezerniertes Mucin, das einen wesentlichen strukturellen Bestandteil von Atemwegs- und Speichelmukus darstellt. Durch umfangreiche O‑Glykosylierung und Polymerisation trägt MUC5B zur mukoziliären Clearance, zum Einfangen von Pathogenen und zur Homöostase der epithelialen Barriere bei; seine Expression wird durch Entzündungs- und Differenzierungsprogramme in sekretorischen Epithelien reguliert. Veränderte MUC5B-Mengen oder rheologische Eigenschaften stehen mit einer gestörten Schleimtransportfunktion und chronischem Umbau der Atemwege in Zusammenhang; zudem wurden genetische und expressionsbezogene Veränderungen mit Lungenfibrose sowie Phänotypen muco-obstruktiver Lungenerkrankungen assoziiert. Als auslesereiches, sezerniertes Glykoprotein wird MUC5B häufig in Studien zur epithelialen Differenzierung, zur sekretorischen Verarbeitung im ER/Golgi und zu Signalwegen der angeborenen Abwehr untersucht.
Das Mucin 5B/MUC5B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MUC5B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MUC5B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MUC5B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Mucin 5B/MUC5B-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MUC5B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Mucin 5B/MUC5B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf MUC5B-Exone abzielen, die für die Mucin 5B/MUC5B-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere MUC5B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Mucin 5B/MUC5B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Mucin 5B/MUC5B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MUC5B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Mucin 5B/MUC5B HDR-Plasmid (h) und Mucin 5B/MUC5B HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MUC5B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MUC5B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.