Mucin 4/MUC4 Double Nickase Plasmid (h): sc-400329-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Mucin 4/MUC4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Mucin 4/MUC4 Double-Nickase-Plasmid (h) und Mucin 4/MUC4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MUC4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Mucin 4/MUC4: sc-33654
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Mucin 4/MUC4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400329-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Mucin 4/MUC4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400329-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MUC4 kodiert Mucin 4, ein hochmolekulares, membranassoziiertes Glykoprotein, das durch umfangreiche O‑Glykosylierung zur Funktion der epithelialen Barriere, zur Lubrikation und zur Bildung der Glykokalyx beiträgt. Als Zelloberflächenmucin ist MUC4 an Zell‑Zell‑ und Zell‑Matrix‑Interaktionen beteiligt und kann Rezeptor‑Signalnetzwerke modulieren, einschließlich ERBB‑Familien‑assoziierter Signalwege, wodurch Proliferation, Differenzierung und Stressantworten beeinflusst werden. Eine veränderte MUC4‑Expression sowie ein Umbau der Glykofomen werden häufig im Zusammenhang mit epithelialer Transformation, invasionsassoziierten Phänotypen und Mechanismen der Immunflucht an mukosalen Grenzflächen untersucht. Diese Eigenschaften machen MUC4 zu einem nützlichen Marker und funktionellen Knotenpunkt für die Untersuchung der Mucinbiologie, der epithelialen Homöostase und des Signalweg‑Crosstalks in krankheitsrelevanten Modellen.
Mucin 4/MUC4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MUC4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MUC4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MUC4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MUC4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.