Mucin 2/MUC2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400221-ACT

MUC2 kodiert Mucin 2, ein wichtiges gelbildendes, sezerniertes Mucin, das das strukturelle Rückgrat der intestinalen Schleimschicht bildet und die Integrität der epithelialen Barriere unterstützt. Durch ausgeprägte O‑Glykosylierung und Polymerisation reguliert MUC2 die Hydratation der Mukosa, die räumliche Organisation von Mikroorganismen und den Schutz vor luminalem Stress und ist damit mit der angeborenen Immun-Signalgebung sowie Programmen der epithelialen Differenzierung verknüpft. Eine veränderte MUC2-Expression oder Mucin-Architektur wird mit einer gestörten Schleimbarriere, Dysbiose und chronischen Entzündungsprozessen im Gastrointestinaltrakt in Verbindung gebracht. MUC2 wird außerdem häufig als Marker der Becherzell-Linie und sekretorischer epithelialer Zustände in Studien zur intestinalen Homöostase und krankheitsbedingtem Remodeling verwendet.

Mucin 2/MUC2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MUC2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Mucin 2/MUC2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MUC2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MUC2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Mucin 2/MUC2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MUC2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Mucin 2/MUC2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Mucin 2/MUC2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MUC2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.