Mucin 17 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404622

Übersicht

MUC17 kodiert Muzin 17, ein membrangebundenes, stark O-glykosyliertes Muzin, das auf der apikalen Oberfläche gastrointestinaler Epithelzellen angereichert ist, wo es die mukosale Barriere und die Homöostase des Epithels unterstützt. Muzin 17 trägt zur Hydratation der Zelloberfläche, zum Ausschluss von Pathogenen und zum Schutz vor mechanischem und chemischem Stress bei und kann über Interaktionen in der Glykokalyx Zelladhäsion und Signalübertragung modulieren. Veränderte MUC17-Expression und Glykosylierungsmuster wurden bei entzündlichen Darmerkrankungen und bei epithelialen Malignomen beschrieben, was dieses Muzin mit Signalwegen in Verbindung bringt, die Barriereintegrität, Differenzierung und Stressantworten steuern. Als Bestandteil der epithelialen Abwehrschnittstelle wird MUC17 häufig in Modellen der Schleimhautentzündung, der Wirt–Mikroben-Interaktionen und tumorassoziierter Veränderungen der Glykoproteinarchitektur untersucht.

Das Mucin 17 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MUC17-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MUC17-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MUC17 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Mucin 17-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MUC17-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Mucin 17-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MUC17-Exone abzielen, die für die Mucin 17-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MUC17-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Mucin 17 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Mucin 17 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MUC17-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Mucin 17 HDR-Plasmid (h) und Mucin 17 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MUC17-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MUC17-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.