Mucin 16/MUC16 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403050-ACT

MUC16 kodiert Muzin 16, ein hochmolekulares, stark O-glykosyliertes transmembranäres Muzin, das zur epithelialen Glykokalyx und zur Barrierefunktion der Schleimhaut beiträgt. Über seine ausgedehnten extrazellulären Tandemwiederholungen und seinen zytoplasmatischen Schwanz moduliert MUC16 Zell‑Zell‑ und Zell‑Matrix‑Interaktionen, beeinflusst Adhäsions‑ und Migrationsprogramme und kann Rezeptor‑Signalnetzwerke sowie die Immunerkennung an der Zelloberfläche mitbestimmen. Eine veränderte MUC16-Expression und -Glykosylierung werden im Kontext epithelialer Malignome umfassend untersucht, da sie mit Veränderungen der Invasivität, des Metastasierungspotenzials und der Interaktionen mit der Tumormikroumgebung korrelieren. Daher wird MUC16 häufig als funktioneller Knotenpunkt genutzt, um die Biologie von Oberflächenmuzinen, Glyko-Epitope und membrannahe Signalgebung in humanen Zellmodellen zu untersuchen.

Mucin 16/MUC16 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MUC16-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Mucin 16/MUC16 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MUC16-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MUC16-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Mucin 16/MUC16-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MUC16-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Mucin 16/MUC16-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Mucin 16/MUC16-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MUC16-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.