Plasmide CRISPR d'Activation (h) Mucin 16/MUC16: sc-403050-ACT

MUC16 code la mucine 16, une mucine transmembranaire de haut poids moléculaire fortement O‑glycosylée, qui contribue au glycocalyx épithélial et à la fonction de barrière des muqueuses. Grâce à ses nombreux motifs répétés extracellulaires en tandem et à sa queue cytoplasmique, MUC16 module les interactions cellule–cellule et cellule–matrice, influence les programmes d’adhésion et de migration, et peut affecter les réseaux de signalisation des récepteurs ainsi que la reconnaissance immunitaire à la surface cellulaire. Les altérations de l’expression et de la glycosylation de MUC16 sont largement étudiées dans le contexte des cancers épithéliaux, où elles sont corrélées à des changements de l’invasion, du potentiel métastatique et des interactions avec le microenvironnement tumoral. Ainsi, MUC16 est souvent utilisé comme nœud fonctionnel pour explorer la biologie des mucines de surface, les glyco‑épitopes et la signalisation proximale de la membrane dans des modèles cellulaires humains.

Mucin 16/MUC16 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MUC16 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Mucin 16/MUC16 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MUC16 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MUC16, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Mucin 16/MUC16. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MUC16 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Mucin 16/MUC16 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Mucin 16/MUC16 dans les cellules tumorales présentant une expression de MUC16 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.