Mucin 12/MUC12 Double Nickase Plasmid (h): sc-400505-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Mucin 12/MUC12 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Mucin 12/MUC12 Double-Nickase-Plasmid (h) und Mucin 12/MUC12 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MUC12 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Mucin 12/MUC12: sc-377269
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Mucin 12/MUC12 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400505-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Mucin 12/MUC12 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400505-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MUC12 kodiert Muzin 12, ein membranassoziiertes Muzin, das auf epithelialen Oberflächen angereichert ist. Seine stark O‑glykosylierte extrazelluläre Domäne trägt zur schützenden Glykokalyx, zur Integrität der Barriere und zu Zell‑Zell‑Interaktionen bei. Über Effekte auf die Architektur der apikalen Membran und über Muzin‑abhängige Signalweg‑Wechselwirkungen kann MUC12 Programme der epithelialen Differenzierung, Adhäsionsdynamiken und Reaktionen auf entzündliche Reize beeinflussen. Veränderte Muzin‑Expressionsmuster, einschließlich einer dysregulierten MUC12‑Expression, werden häufig im Kontext von epithelialem Remodeling, chronischen Entzündungen und der Biologie gastrointestinaler Erkrankungen untersucht. Als Oberflächen‑Glykoprotein mit umfangreichen Glykan‑Modifikationen ist MUC12 zudem für Untersuchungen von Glykosylierungswegen relevant und dafür, wie die Zusammensetzung der Glykokalyx die Gewebehomöostase moduliert.
Mucin 12/MUC12 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MUC12-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MUC12 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MUC12-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MUC12-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.