Mts1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401774-ACT

S100A4 (Mts1) ist ein kalziumbindendes Protein der S100-Familie, das als Regulator der Zytoskelettdynamik, der Zellmotilität und des Remodellings der extrazellulären Matrix fungiert. Durch die Interaktion mit nichtmuskulärem Myosin II und weiteren zytoskelettassoziierten Partnern beeinflusst S100A4 die Aktinorganisation sowie Signalwege, die mit epithelial-mesenchymaler Transition (EMT), Invasion und dem Trafficking von Entzündungszellen verknüpft sind. Eine veränderte S100A4-Expression ist häufig mit fibrotischem Remodeling, chronischer Entzündung und metastatischer Progression in mehreren Tumorentitäten assoziiert und macht S100A4 zu einem nützlichen Marker und mechanistischen Knotenpunkt für die Untersuchung zellulärer Plastizität. In humanen Modellsystemen unterstützt S100A4 die Forschung zu Migration, Adhäsionsumsatz und mikroumgebungsabhängiger Signalgebung, die Gewebeumbau und Krankheitsphänotypen prägt.

Mts1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen S100A4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Mts1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des S100A4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der S100A4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Mts1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native S100A4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Mts1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Mts1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem S100A4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.