Plasmide CRISPR/Cas9 KO MTMR7 (h): sc-405863

Présentation

MTMR7 code la protéine apparentée à la myotubularine 7, une phosphatase lipidique catalytiquement active qui déphosphoryle le phosphatidylinositol 3-phosphate et le phosphatidylinositol (3,5)-bisphosphate, modulant ainsi le trafic membranaire dépendant des phosphoinositides. En régulant la dynamique endosomale, le recyclage des récepteurs et la maturation des vésicules, MTMR7 contribue au contrôle des sorties de signalisation de voies telles que EGFR/MAPK et des réseaux associés à PI3K. Une activité altérée de MTMR7 a été associée à des phénotypes de prolifération et de migration cellulaires dérégulés, ce qui étaye sa pertinence dans les études de la signalisation oncogénique et de l’homéostasie épithéliale. Son rôle dans le renouvellement des phosphoinositides s’inscrit aussi dans des processus plus larges, notamment l’autophagie et la fonction lysosomale, fréquemment perturbées dans des états cellulaires associés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MTMR7 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MTMR7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MTMR7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MTMR7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MTMR7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MTMR7 pour l'étude de la signalisation de MTMR7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MTMR7 essentiels à la fonction de MTMR7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MTMR7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MTMR7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MTMR7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MTMR7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MTMR7 plasmide HDR (h) et le MTMR7 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MTMR7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MTMR7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.