MTHFD1L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417762

Übersicht

MTHFD1L kodiert ein mitochondriales, folatabhängiges Enzym, das den Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsel unterstützt, indem es Formiat und verwandte Ein-Kohlenstoff-Einheiten erzeugt, die zur Aufrechterhaltung zytosolischer Folatzyklen genutzt werden. Diese Aktivität verknüpft den mitochondrialen Serin-/Glycinabbau mit der Nukleotidbiosynthese, der Methylierungskapazität und dem Redoxgleichgewicht und beeinflusst damit die DNA-Replikation und die epigenetische Regulation. Eine veränderte MTHFD1L-Funktion wurde mit metabolischer Umprogrammierung und proliferativen Phänotypen in mehreren Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, darunter auch mit der krebsassoziierten Umgestaltung von Ein-Kohlenstoff-Stoffwechselwegen. Daher wird MTHFD1L häufig im Zusammenhang mit dem Folatstoffwechsel, der mitochondrialen Funktion und der Genomstabilität unter Nährstoff- oder oxidativem Stress untersucht.

Das MTHFD1L CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MTHFD1L-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MTHFD1L-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MTHFD1L nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MTHFD1L-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MTHFD1L-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MTHFD1L-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MTHFD1L-Exone abzielen, die für die MTHFD1L-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MTHFD1L-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MTHFD1L CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MTHFD1L CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MTHFD1L-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MTHFD1L HDR-Plasmid (h) und MTHFD1L HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MTHFD1L-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MTHFD1L-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.